. Die biologische Bulletin. Biologie; Zoologie; Biologie; Meeresbiologie. PERIPHYLLA LUCIFERASE 247. Die elution Volume (ml) Abbildung 2. Reinigung von Periphylla luciferase-O durch Gel Filtration auf eine Spalte von Superose 6 Prep Güteklasse (1 cm x 19 cm) mit 10 mM Tris-HCl, pH 7,7, mit 1 M KCI, 2 M guanidine Hydrochlorid, und 0,5 % Glukose. Durchgezogene Linie: Absorption mit einem 0,5-cm Licht gemessen - Pfad Küvette: gestrichelte Linie: acfivity lummes - wie bei einem Photometer Empfindlichkeit von 1,1&lt gemessen; 10 "quanta/L.U. obwohl es möglicherweise enthielt einige inaktivierten Luciferase (siehe auch die Diskussion unter

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. The Biological bulletin. Biology; Zoology; Biology; Marine Biology. PERIPHYLLA LUCIFERASE 247. Elution volume (ml) Figure 2. Purification of Periphylla luciferase-O by gel filtration on a column of Superose 6 Prep grade (1 cm X 19 cm) using 10 mM Tris-HCl buffer, pH 7.7, containing 1 M KCI, 2 M guanidine hydrochloride, and 0.5% glucose. Solid line: absorbance measured with a 0.5-cm light-path cuvette: dotted line: lummes- cence acfivity measured at a photometer sensitivity of 1.1 < 10" quanta/L.U. though it possibly contained some inactivated luciferase (also see the discussion below in connection with the measurement of quantum yield). The purity of the lucifer- ase-O obtained must be lower than that of the luciferase- L, because the purification method involved only one step of chromatography. The molecular weights of luciferase- L and luciferase-O, as estimated by gel filtration, were about 32, 000 and 75, 000, respectively (Fig. 3). Enzymatic properties of the luciferase The relationship between the intensity of emitted light and the pH of the buffer used (Fig. 4) indicates that JZ <D O a o 2 200 150 100 90 80 70 60 50 40 30 20 - 15 10 ) Aldolase I BSA dimer g P I'ase-O • BSA monomer • Egg albumin • Carbonic anhydrase Egg albumin • P. I'ase-L Chymotrypslnogen A RIbonuclease ^ 12 13 14 15 16 17 1£ Elution volume (ml) 19 20 21 Figure 3. Determination of the molecular weights of luciferase-L (P. Tase-L; solid line) and luciferase- O iP. I'ase-O; dotted line) by gel filtration. Luciferase-L was measured on a Superde.x 200 Prep column (1 cm X 28 cm) in 10 mM acetate buffer, pH 4.8, containing 1 M KCI. and luciferase-O on a Superose 6 Prep grade column (1 cm x 21 cm)in 10 mM Tris-HCl buffer, pH 7.7, containing 2 A/guanidine hydrochlonde. 1 M KCI. and 0.5% glucose. Protein standards used are indicated at appropriate points on the solid and dotted lines.. Please note that these images are extracted from scanned page images that may have been digita

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